5分钟科普“微乐棋牌有挂吗”(详细开挂教程)

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2024微乐麻将插件安装开挂技巧教程

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2024微乐麻将插件安装ai黑科技系统规律教程开挂技巧

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采用常规酚-氯仿抽提法方法提取组织DNA ，通过延长水浴时间提高提取DNA得率 。方法 各组设置不同的水浴时间
，比较所提DNA得率
。结果 用酚-氯仿提取肝脏DNA，随着水浴时间的延长（2.5～7.5h） ，DNA提取得率由每100mg肝脏组织中得到341.4μg提高到701.9μg。结论 该方法适用于用酚-氯仿对少量组织需提取较大量DNA的实验
，为下一步的实验研究做准备 。

关键词 酚-氯仿;DNA得率

基因组DNA在分子生物学研究中应用广泛
。酚-氯仿提取组织DNA的方法从上个世纪八十年代开始应用，以其操作简便 ，效果好而一直方兴未艾。本实验旨在对酚-氯仿提取组织基因组DNA的过程加以改进，从少量组织中提取较大量DNA
，用于下一步实验研究［1］ 。

1 材料与方法

1.1 材料 每个样本取SD大鼠肝脏0.1g，共做24个样 本 ，以8个样本为一组
，每组水浴时间不同，Ⅰ组水浴2.5h；Ⅱ组水浴5h；Ⅲ组水浴7.5h。

1.2 主要试剂 细胞裂解液：30mM Tris-HCl ，0.1mM EDTA
，0.1 mM NaCl，pH 8.0；10mg/ml蛋白酶K 、SDS
、饱和 酚、氯仿 、异戊醇、无水酒精
、1mol/L TE缓冲液
。

1.3 方法

1.3.1 酚-氯仿提取组织基因组DNA［2］ (1)取100mg肝脏加1ml细胞裂解液 ，用玻璃匀浆器匀浆；(2)匀浆液倒入2ml塑料离心管中
，加20μl蛋白酶K，再加SDS至终浓度为1％ ，上下颠倒混匀；(3)混合液置于55℃水浴
，水浴时间分别为Ⅰ组2.5h、Ⅱ组5h 、Ⅲ 组7.5h；(4)水浴完毕后，向匀浆液中按1：1比例加酚/氯仿/异戊醇混合液（25：24：1） ，轻轻震荡混匀5min，12000g离心5min；(5)吸上层水相800μl于一灭菌塑料离心管中
，加入等体积酚/氯仿/异戊醇混合液，轻轻震荡混匀5min ，12000g离心5 min；(6)吸上层水相500μl于一塑料离心管中
，加入两倍体积的无水乙醇，-20℃放置2h或液氮中放置5min；(7)12000g离心5min ，沉淀DNA,倾去上清液；(8)于沉淀中加入75%乙醇溶液500μl
，轻轻混匀后12000g离心5min，倾去上清液 ，室温凉干；(9)向DNA沉淀中加200μl TE缓冲液
，-20℃保存备用。

1.3.2 DNA纯度和浓度的测定 取10μl TE溶解的DNA溶于2500μl双蒸水中，用国产UV-754分光光度计测260nm和280nm吸光值 ，计算OD值和提取DNA的浓度和纯度 。

1.3.3 统计学处理 对三组样本的得率进行统计学处理
，各组间检测数据均由均数±标准差表示；组间均值的比较用单一因素方差分析（ANOVA）处理
。

2 结果

Ⅰ
、Ⅱ、Ⅲ组的DNA样品浓度和纯度检测结果分别见表1 、表2和表3。

表1 各样本水浴2.5h提取DNA的各项数据　略

表2 各样本水浴5h提取DNA的各项数据　略

表3 各样本水浴7.5h提取DNA的各项数据　略

对三组样本的DNA得率进行比较和统计学分析结果见表4 。

表4 不同水浴时间酚
、氯仿提取DNA得率比较 （略）

结果显示，用酚、氯仿提取肝脏DNA ，随着水浴时间的延长（2.5～7.5h之间），DNA提取得率提高
。Ⅰ组与Ⅱ组 、Ⅱ组与Ⅲ组
、Ⅰ组与Ⅲ组间所提DNA得率的比较
，各组间均 差异有显著性。

植物DNA提取中怎样检测提取到DNA质量

原理上是可以的，但是我们是不会用植物的根提取DNA的 。这样很麻烦！

首先是植物有细胞壁的 ，我们还要用纤维素酶果胶酶去除细胞壁
，其次是细胞内的细胞器很多我们做实验的时候是要细胞核内的染色体的DNA，所以在书上所说的步骤中我们还要过滤掉杂质（各种细胞器 ，蛋白质）

这也是我们为什么要用成熟的红细胞提取DNA的原因
，它高度分化，没有任何细胞器放入蒸馏水中后 ，由于细胞内的渗透压大于外界水中的
，所以胀破了，再提取DAN就容易多了

第一种方法是测量260/280的比例 ，判断是否有蛋白质的污染
。在260nm和280nm处测定DNA溶液的光吸收
，A260与A280之比应在1.75-1.80之间。低于此值表明制备物中残留蛋白质成分较高或含有酚，高于此值表明有RNA的残留 。

第二种方法是凝胶电泳分析 ，看有无断裂降解
。

影响DNA提取质量的因素：

如果实验开始植物样品不经液氮处理，则提取液中的CTAB浓度需要提高到4%。

在大多数情况下
，使用0.1%巯基乙醇，并不能完全抑制叶片中的氧化作用 。但这种氧化作用不会影响限制性内切酶的活性。如果使用的巯基乙醇浓度高于0.1% ，则会大大降低DNA提取的得率
。

扩展资料：

DNA的提取方法：

一、酚抽提法：先用蛋酶K 、SDS破碎细胞
，消化蛋白，然后用酚和酚-氯萃取 ，高速离心后取上清
，所得DNA大小为100-150kb

二
、甲酰胺解聚法：破碎细胞同上，然后用高浓度甲酰胺解聚蛋白质与DNA的结合 ，再透析获得DNA可得DNA200kb左右。

三、玻璃棒缠绕法：用盐酸胍裂解细胞
，将裂解物铺于乙醇上，然后用带钩或U型玻璃棒在界面轻搅 ，DNA沉淀液绕于玻棒 。生成DNA约80kb
。

四 、异丙醇沉淀法：基本同1法
，仅用二倍容积异丙醇替代乙醇，可去除小分子RNA（在异丙醇中可溶状态）

五、表面活性剂快速制备法：用Triton X-100A或NP40表面活性剂破碎细胞 ，然后用蛋白酶K或酚去除蛋白，乙醇沉淀或透析。

六
、加热法快速制备：加热96℃-100℃
，五分钟，然后离心后取上清 ，可用于PCR反应 。

七、碱变性快速制备：先用NaOH作用20分钟
，再加HCI中和，离心后取上清 ，含少量DNA
。

百度百科-DNA提取

关于“植物基因DNA的提取实验报告”这个话题的介绍
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